猪圆环病毒病防控技术研究与应用

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的一种新的重要传染病,临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)、猪皮炎肾炎综合症、猪呼吸道疾病综合征和母猪繁殖障碍等多种疾病,亚临床感染引起免疫抑制,造成世界养猪业巨大经济损失,并严重影响我国养猪业发展。本项目通过近10年系统研究工作,在病原流行病学、致病机制、诊断与免疫等取得重要成果,率先研制成功PCV2灭活疫苗,实现产业化生产,打破了国外同类疫苗垄断中国市场的局面,产生了重大影响,取得明显经济效益和社会效益。主要技术创新点为:(1)病毒变异与流行病学:通过病原流行病学调查、病原分离鉴定、流行毒株基因序列测定和猪体外人工感染试验,阐明2002-2010年江苏、上海和浙江等10个省市规模猪场本病病原流行病学特征;发现我国存在PCV2a向PCV2b的基因漂移现象,主要流行毒株属于PCV2b亚型,为本病防控提供了可靠依据。(2)病毒致病与免疫机制:通过猪体内外病毒感染试验,阐明PCV2感染引起免疫抑制机制,发现Pig-MAP可以作为病程发展的重要检测指标;首次构建成功PCV2 Cap重组腺病毒,发现其可以诱导猪体产生免疫保护反应;成功利用腺病毒介导靶向PCV2 基因siRNA,揭示其抑制PCV2复制及其分子机制;发现病毒Cap蛋白糖基化位点缺失可以增强其免疫作用,丰富了PCV2感染和免疫机制理论。(3)诊断技术:成功建立了PCV2 PCR和实时荧光定量PCR检测方法;研制获得PCV2单克隆抗体,建立成功PCV2抗原免疫组织化学方法;建立成功PCV2 抗体ELISA检测方法,组装ELISA抗体检测试剂盒,均具有较高特异性和敏感性,为PCV2检测、PMWS诊断和免疫抗体监测提供了有用工具。(4)免疫防控技术:从我国患病猪群分离获得PCV2-SH毒株,阐明其生物学特性和免疫原性,疫苗制备工艺取得重要突破,克隆成功一株PCV2易感的PK15-B1细胞系,筛选获得PCV2灭活方法和新型双相复乳免疫佐剂,并建立成功参考疫苗小鼠模型替代猪体检验标准体系,研制成功猪圆环病毒2型灭活疫苗,在国内率先获得国家二类新兽药注册证书。

本项目在国内外核心期刊发表研究论文60篇,其中11篇被SCI收录,申请发明专利5项,获得授权2项,国家二类新兽药证书1个,疫苗生产文号2个。猪圆环病毒2型灭活疫苗(SH株)实现产业化生产,并打破了国外同类疫苗垄断中国市场的局面,至2012年6月已推广使用4592万头份,新增产值2.028亿元,挽回经济损失39.721亿元,经济效益和社会效益十分显著。2011年3月该项目通过农业部科技成果鉴定,研究成果水平达国际先进,部分国际领先,对预防和控制猪圆环病毒病感染具有重要价值。